摘要：目的:構建RNR3啟動子調控的紅綠熒光蛋白雙信號發光酵母細胞,用于快速篩選化學誘變原。方法:用PCR方法YIPlac204TC-NLS-DsRed-Express-2擴增DsRed-Express-2紅色熒光蛋白,將其插入到pGPD載體,構建成GPD啟動子驅動的紅色熒光蛋白酵母報告載體(pGPD-DsRed-Express2),用醋酸鋰方法將其轉化于RNR3啟動子調控的綠色熒光蛋白(yEGFP)發光酵母細胞(W303-1A/RNR3-yEGFP),從而構建成紅、綠熒光蛋白雙信發光酵母細胞。紅色熒光蛋白(DsRed-Express-2)信號可用于校正細胞數和狀態不同對yEGFP發光的影響。用不同誘變原分別作用于該發光酵母細胞,于第0、4、8、12、16和20小時,用黑色96孔酶標板分別測紅、綠熒光蛋白的發光強度,用相對熒光強度(yEGFP/DsRed-Express2)描述誘變原的劑量效應關系。結果:在與DNA發生結合的化合物中,放線菌素D和溴乙錠均呈陰性;在與DNA發生烷基化的化合物中,甲磺酸甲脂(MMS)和瘤可寧呈陽性結果,而絲裂霉素C呈陰性結果;在使DNA發生斷裂的誘變原中,順鉑、博來霉素和福來霉素呈陰性,而4-硝基-N-氧化喹啉(4-NQO)呈陽性結果;在抑制DNA合成酶或拓撲異構酶的誘變原中,5-氟尿嘧啶呈陽性結果,而羥基脲、喜樹堿和阿非迪霉素均呈陰性結果;非基因毒性化合物秋水仙堿、刀豆氨酸和四環素均呈陰性。結論:該重組發光酵母細胞(W303-1A/yEGFP/DsRed-Express2)可作為傳統致突變評價方法的補充,具有快速、方便和高通量特點。