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擬南芥AtGrp7RRM結構域的純化及其結構與結合的初步分析(英文)
遲秀娟; 喬曉亞; 劉穎; 劉惠麗; 陳雷; 王際輝; 艾選軍 大連工業大學生物工程學院; 遼寧大連116034; 潔凈能源國家實驗室(中國科學院大連化學物理研究所); 遼寧大連116023; 國家艾滋病性病防治中心; 病毒與免疫研究室; 北京102206; 波譜與原子分子物理國家重點實驗室、武漢磁共振中心(中國科學院武漢物理與數學研究所); 湖北武漢430071
- 快速稀釋
- atgrp7
- 結合分析
摘要：富含甘氨酸的RNA結合蛋白AtGrp7是擬南芥(Arabidopsis thaliana)調節生物鐘負反饋回路的組分.在使用常規方法純化AtGrp7 RRM結構域的初始試驗中,觀察到煙草蝕紋病毒(TEV)酶切后AtGrp7 RNA識別基序(RRM)結構域的紫外吸收峰為蛋白和雜質的混合信號峰.為解決常規純化中的雜質問題,對AtGrp71-90應用了變性-復性兩步純化方法.AtGrp7 RRM結構域的1H-15N HSQC指紋譜和CS-Rosetta模型結構表明快速稀釋重折疊后其結構完全恢復.等溫滴定量熱法(ITC)和核磁共振(NMR)滴定實驗進一步證實,重折疊后AtGrp71-90 RRM結構域具有正確結合RNA/DNA的功能.
- 快速稀釋
- atgrp7
- 結合分析
摘要：富含甘氨酸的RNA結合蛋白AtGrp7是擬南芥(Arabidopsis thaliana)調節生物鐘負反饋回路的組分.在使用常規方法純化AtGrp7 RRM結構域的初始試驗中,觀察到煙草蝕紋病毒(TEV)酶切后AtGrp7 RNA識別基序(RRM)結構域的紫外吸收峰為蛋白和雜質的混合信號峰.為解決常規純化中的雜質問題,對AtGrp71-90應用了變性-復性兩步純化方法.AtGrp7 RRM結構域的1H-15N HSQC指紋譜和CS-Rosetta模型結構表明快速稀釋重折疊后其結構完全恢復.等溫滴定量熱法(ITC)和核磁共振(NMR)滴定實驗進一步證實,重折疊后AtGrp71-90 RRM結構域具有正確結合RNA/DNA的功能.
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