摘要：【目的】建立快速檢測羅非魚羅湖病毒(Tilapia Lake Virus,Ti LV)的RT-PCR方法。【方法】參照GenBank中羅非魚羅湖病毒全基因序列,依據其假定蛋白基因片段3設計合成1對特異性擴增引物,提取羅湖病毒RNA,逆轉錄成cDNA,進行PCR擴增,通過優化擴增條件和擴增體系,建立快速檢測羅非魚羅湖病毒的RT-PCR方法。用該方法對自然感染羅湖病毒發病的羅非魚樣品進行RT-PCR擴增。【結果】RT-PCR擴增得到與試驗設計相符的499 bp的特異性目的條帶,而對健康羅非魚、野生羅非魚及其他病毒對照組的擴增結果均為陰性。測序比對結果表明,該方法檢測結果準確,最低可檢測出約10fg/mL的質粒DNA,具有較好的特異性和較高的敏感性。用該方法對332份臨床樣品進行RT-PCR檢測,其中36份樣品擴增出特異性的目的條帶,經測序比對,檢測結果正確。【結論】建立的檢測方法可用于TiLV的檢測。