摘要：目的:建立從糞腸球菌-艱難梭菌混合培養物中分離艱難梭菌的方法。方法:取不同廠家腦心浸出液(BHI)培養基、不同抗生素和是否添加羊血(或血清)3種組分進行組合,加入糞腸球菌-艱難梭菌混合物進行培養;顯微鏡觀察不同組分培養基中細菌形態,將不同組分培養基中獲得的混合培養物劃線固體平板培養基并培養、觀察菌落形態及菌落氣味,采用16SrDNA測序技術評價不同組合培養基對艱難梭菌的純化效果。結果:艱難梭菌抗生素抗性實驗結果顯示,艱難梭菌對氯霉素、克拉霉素和氨芐青霉素敏感,對四環素、D-環絲氨酸和頭孢西丁具有抗性;在相同艱難梭菌接種量條件下,不同生產廠家BHI-酵母粉培養基(BHIS)均有艱難梭菌典型的沉淀生成,并伴有濃烈臭雞蛋氣味;顯微鏡觀察發現純化前艱難梭菌與糞腸球菌共培養物有大量球菌和鏈球菌、少量桿菌;BHIS-BDC培養基所有視野中無球菌,僅見桿狀細菌;BHIS培養基上艱難梭菌僅在平板邊緣形成零星菌落,BHIS-BDC培養基表面形成典型艱難梭菌菌落;16SrDNA測序結果表明1~2mm菌落為糞腸球菌,3~5mm菌落為艱難梭菌。結論:不同生產廠家的BHIS培養基對艱難梭菌中糞腸球菌的去除沒有明顯差異,BHIS培養基中添加羊血、D-環絲氨酸與頭孢西丁復合抗生素可去除艱難梭菌中糞腸球菌污染。