摘要：目的:使用CRISPR-Cfp1系統敲除艱難梭菌毒性(PaLoc)毒力基因島,構建無毒性艱難梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,構建針對PaLoc毒力島的基因打靶質粒pWH53;將pWH53質粒轉化艱難梭菌630菌株后,誘導Cpf1蛋白表達,PCR篩選發生雙交換的PaLoc敲除突變株,測序驗證設計位點是否發生等位雙交換。結果:PCR結果顯示,獲得的16株轉化子中有8株為敲除PaLoc突變株,陽性率為50%;測序結果顯示,獲得的8株敲除PaLoc突變株均在設計位點發生了等位雙交換。結論:成功構建艱難梭菌毒性毒力島敲除PaLoc突變株。