摘要：本研究利用Red/ETDNA重組技術對實驗室已有的含鼠李糖基轉移酶基因RhlAB的分泌表達載體pBBR1-genta-RhlAB進行修飾,將3種不同強度組成型啟動子(Papra、Ptac和PrhaB)成功替換了RhlAB基因在銅綠假單胞菌中的原始啟動子,成功獲得了表達載體pBBR1-genta-Papra-RhlAB,pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB,并將這些表達載體分別在防御假單胞菌Pf-5中異源表達,通過LB培養(yǎng)基發(fā)酵42h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂產量為17.56mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-Papra-RhlAB,Pf-5/pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB分別是11.135mg/L,441.135mg/L,557.764mg/L,啟動子優(yōu)化后產量分別是原始啟動子的0.63,25.12和31.76倍。對發(fā)酵產物進行高效液相色譜-質譜聯(lián)用技術分析,共檢出相對含量變化的4類質核比不同的鼠李糖脂同系物。并通過實時熒光定量PCR檢測RhlAB基因的表達量,發(fā)現(xiàn)啟動子替換為Ptac和PrhaB后RhlAB基因表達量分別是原始啟動子的2.16和2.77倍。本研究初步實現(xiàn)了RhlAB基因在Pf-5中的表達,發(fā)現(xiàn)組成型啟動子Ptac和PrhaB比RhlAB的原始啟動子表達效率更高,可為異源合成鼠李糖脂提供重要參考。