摘要：超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物體內(nèi)超氧陰離子自由基的主要抗氧化酶家族。基于原核表達(dá)系統(tǒng),成功表達(dá)了擬步甲科Tenebrionidae小胸鱉甲Micordera punctipennis胞外銅鋅SOD的重組蛋白(本文定義為Trx-His-MpecCu/Zn-SOD)。經(jīng)Ni 2+親和層析法純化重組蛋白后,研究了重組蛋白的部分酶學(xué)性質(zhì)。通過足墊加皮下注射法3次免疫小鼠后,分別用ELISA和Western blot的方法檢測抗體效價和抗體特異性。結(jié)果表明,重組蛋白主要以包涵體形式存在,純化后的重組蛋白濃度為1.33 mg·mL^-1,酶活力為27.52 U·mg^-1。Trx-His-MpecCu/Zn-SOD在25~45℃具有比較穩(wěn)定的酶活性,在35℃最高,同時表現(xiàn)出比較廣泛的酸堿耐受性(pH3~12),最適pH為9.0,表明重組蛋白的酶活性相對比較穩(wěn)定。蛋白免疫法制備的鼠抗MpecCu/Zn-SOD多克隆抗體滴度高于1∶819 200。Western blot結(jié)果顯示,該抗體能免疫結(jié)合重組蛋白Trx-His-MpecCu/Zn-SOD和小胸鱉甲體內(nèi)天然MpecCu/Zn-SOD,但不能與黃粉蟲Tenebrio molitor的總蛋白結(jié)合,說明制備的抗體效價較高且特異性較好。本研究結(jié)果為小胸鱉甲ecCu/Zn-SOD功能的深入研究奠定了基礎(chǔ)。