摘要：目的目的以Picrophilus torridus DSM9790基因組為模板,克隆嗜熱酯酶EstPt 1的基因,實(shí)現(xiàn)其在大腸桿菌BL21(DE3)中的表達(dá),并對重組EstPt 1進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)表征。方法利用PCR擴(kuò)增,獲得EstPt 1基因,連接到pET-28a(+)質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)中,構(gòu)建重組工程菌株。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),對硝基苯酚法(pNPB),薄層色譜(TLC)和高效液相色譜法(HPLC)對EstPt 1的性質(zhì)進(jìn)行研究。結(jié)果EstPt 1成功表達(dá),分子量為35 kD;最適反應(yīng)溫度為85℃,最適pH 9.0,有良好的熱穩(wěn)定性和酶活,能在24 h內(nèi)完全降解5 mmol/L鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)。結(jié)論重組EstPt 1有很強(qiáng)的高溫耐受性和穩(wěn)定性,以及良好的DBP降解活性。