摘要：目的:運用CRISPR/Cas9技術敲除大鼠C6細胞系的IL-12p35基因,構建IL-12p35基因穩定敲除細胞株。方法:構建Lenti-sgRNA-EGFP質粒CRISPR/Cas9系統的Cas9核酸內切酶基因,慢病毒感染C6細胞后進行MTT[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]檢測及PI-FACS(Facial Action Coding System)細胞周期檢測。結果:針對IL-12p35基因的KO1、KO2、KO3三個靶點,進行慢病毒轉染,轉染效率均大于80%。酶切前后靶點活性均下調,免疫印跡驗證C6細胞中靶點有效性。MTT檢測結果IL-12p35基因敲除后于第5天細胞增殖倍數明顯降低。IL-12p35基因敲除后顯著影響細胞周期G1期,G2/M期。結論:本研究構建IL-12p35基因的CRISPR/Cas9敲除系統,獲得穩定的IL-12p35基因敲除細胞株,為后期IL-12p35與膠質瘤細胞的發生、發展機制方面研究提供基礎。