摘要：為研究dnaJ基因序列與細(xì)菌致病力的關(guān)系,本研究構(gòu)建了dnaJ基因缺失株和互補(bǔ)株,并對(duì)其致病性進(jìn)行驗(yàn)證。參照GenBank中無乳鏈球菌GD201008-001(登錄號(hào):NC_018646)目的基因序列分別設(shè)計(jì)引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通過融合PCR將兩個(gè)片段連接到一起,構(gòu)建dnaJ基因上、下游同源臂融合片段,PCR克隆含有啟動(dòng)子序列的dnaJ基因。將dnaJ基因上、下游同源臂融合片段和含有啟動(dòng)子序列的dnaJ基因分別連接鏈球菌-大腸桿菌穿梭質(zhì)粒pSET4s和pSET2,電轉(zhuǎn)化GD201008-001感受態(tài)細(xì)胞,構(gòu)建dnaJ基因缺失株ΔdnaJ和互補(bǔ)株CΔdnaJ。通過分析ΔdnaJ和CΔdnaJ的遺傳穩(wěn)定性與形態(tài)學(xué)變化對(duì)dnaJ上、下游基因轉(zhuǎn)錄的影響,以及生長(zhǎng)速率和斑馬魚攻毒試驗(yàn)評(píng)價(jià)dnaJ基因?qū)o乳鏈球菌毒力的影響。經(jīng)PCR鑒定和測(cè)序證明,ΔdnaJ和CΔdnaJ構(gòu)建成功;與野生株GD201008-001相比,ΔdnaJ和CΔdnaJ在細(xì)菌染色形態(tài)上均無明顯差異,但ΔdnaJ在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度明顯減緩;dnaJ基因的缺失未對(duì)相鄰基因的轉(zhuǎn)錄造成影響;ΔdnaJ對(duì)斑馬魚的毒力明顯下降,對(duì)斑馬魚的LD 50為5.68×10 4 CFU,約是野生株的241倍。dnaJ基因?qū)o乳鏈球菌的毒力有顯著影響,本試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步探究無乳鏈球菌dnaJ基因的功能提供了參考依據(jù)。