摘要：本研究旨在克隆水牛SIRT 6基因,構建真核表達載體,并對該基因進行生物信息學及組織表達譜分析。以牛SIRT 6基因編碼區為種子序列(GenBank登錄號:NM_001098084.1),應用Oligo 7.0軟件設計引物序列,用RT-PCR方法擴增水牛SIRT 6基因完整編碼區序列,測序鑒定后進行生物信息學分析,構建逆轉錄病毒載體pMXs-SIRT6-IRES-GFP,并在HEK-293T細胞和水牛胎兒成纖維細胞上進行重組載體表達鑒定;采集水牛心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腸、腦、皮膚、生殖嵴分別提取RNA,反轉錄后以cDNA為模板進行實時熒光定量PCR,檢測SIRT 6基因在各組織中的表達差異。結果表明,水牛SIRT 6基因編碼區全長1 080 bp,編碼359個氨基酸,其中亮氨酸及脯氨酸含量最高(10.3%),酪氨酸含量最低(1.1%)。水牛SIRT 6基因核苷酸序列與牛、人和小鼠的同源性分別為98.4%、86.7%和78.5%,物種間同源性較低。系統進化樹結果表明,水牛與牛聚為一支,再與人、小鼠聚為一大支,親緣關系相對較近,與果蠅親緣關系較遠。SIRT6蛋白理論分子質量為39.47 ku,分子式為C 1737 H 2783 N 509 O 516 S 13,等電點為8.48,不存在跨膜區,為膜內蛋白;含有Sirtuin家族特有的Sir2去乙酰化酶的催化結構。二級結構預測結果顯示,水牛SIRT6蛋白包含13個α-螺旋、27個β-折疊、24個T-轉角和20個無規則卷曲。逆轉錄病毒載體介導的SIRT 6基因能在HEK-293T細胞和水牛胎兒成纖維細胞中表達。實時熒光定量PCR結果顯示,SIRT 6基因在水牛心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腸、腦、皮膚、生殖嵴中均有表達,其中在生殖嵴中表達量最高,在皮膚中的表達量次之,而在肝臟中表達量最低。本試驗結果將為水牛SIRT 6基因的功能研究提供參考。