摘要：為探尋鴨瘟病毒(DEV)基因組中適合外源基因插入的復制非必需區(qū),本研究利用本實驗室前期建立的DEV疫苗株多片段拯救系統(tǒng),結(jié)合E/T克隆技術(shù)、LR克隆技術(shù)將含有紅色熒光蛋白(RFP)表達框架的目的片段,定向插入到含DEV基因組復制非必需區(qū)的粘粒中,該位點位于DEV基因組UL區(qū)的UL44.5和UL44之間,拯救獲得了重組病毒(rDEV)。通過PCR和熒光顯微鏡鑒定該重組病毒。結(jié)果顯示,經(jīng)PCR擴增,r DEV可以擴增到預期目的片段,觀察可見紅色熒光,表明RFP基因能夠在重組病毒中穩(wěn)定存在并正確表達;生長動力學結(jié)果顯示,重組病毒在CEF中的增殖效率與DEV疫苗株無顯著差異。將r DEV以105 TCID50的劑量免疫SPF鴨后,DEV攻毒保護試驗結(jié)果顯示,r DEV和親本株DEV活疫苗對SPF鴨的保護效率均為100%。本研究篩選到DEV基因組中的一個可供外源基因插入的位點,為以DEV為載體構(gòu)建相關(guān)重組疫苗研制提供依據(jù)。