摘要：目的構建含有人叉頭框蛋白O1(FoxO1)結合靶位點(即胰島素反應元件,IRE)的以螢火蟲熒光素酶(Luc2)和增強型綠色熒光蛋白(EGFP)為雙報告基因的FoxO1抑制劑高通量篩選細胞模型,進行FoxO1抑制劑的篩選,并對獲得的陽性化合物細胞活性進行初步研究,以期獲得能夠調節糖脂代謝紊亂相關疾病的先導化合物或候選藥物。方法用分子生物學的方法,構建含有胰島素反應元件的并連接Luc2和EGFP雙報告基因的重組載體pc-IRE-LE。將體外培養的HEK293T細胞用該重組載體進行瞬時轉染,分別利用螢火蟲熒光素酶試劑盒和熒光顯微鏡對熒光素酶活性及綠色熒光蛋白表達進行檢測,從而構建細胞模型并對其進行進一步優化和評價。應用該細胞模型對化合物庫進行高通量篩選,隨后利用實時定量RT-PCR的方法對篩選獲得的陽性化合物的FoxO1抑制劑活性,即對FoxO1多個糖脂代謝相關靶基因mRNA表達進行檢測。結果成功構建了具有Luc2和EGFP雙報告基因的FoxO1抑制劑高通量篩選細胞模型,并完成了模型評價。經過對6000余個化合物的篩選,共獲得6個具有明顯的劑量-效應關系的陽性化合物。其中化合物7625-H9在模型上表現出良好的FoxO1抑制劑活性,并在細胞上對FoxO1多個靶基因PEPCK、G6Pase、apoC-Ⅲ和MTP的mRNA水平均有顯著的抑制作用。結論該模型符合高通量篩選的要求,可用于FoxO1抑制劑的高通量篩選。該模型的應用將為新型調節糖脂代謝紊亂藥物的發現提供一個可靠而有效的方法。