摘要：目的探討1例臨床出血表現與凝血因子Ⅷ活性（Fvm：C）檢測結果明顯不符的血友病A患者表型、基因型診斷及其分子發病機制。方法凝血、抗凝及纖溶相關指標檢測，一步法及發色底物法檢測FⅧ：C，ELISA法檢測FⅧ的抗原（FVIH：Ag）。活化部分凝血活酶時間（APTr）糾正實驗篩查FⅧ抑制物；PCR擴增先證者F8基因的所有外顯子及其側翼序列，利用直接核苷酸測序法進行基因序列分析。針對先證者的基因突變位點，對其家系成員進行相應外顯子基因檢測；定點突變法構建B亞基缺失（760aa～1639aa）的人FⅧHis99Arg和His99Ala兩種突變的表達質粒（pRC／RSV—BDhFⅧcDNA），兩種突變質粒分別瞬時轉染HEK293T細胞，測定細胞上清液中的FⅧ：C和細胞上清液及裂解液中的FVIU：Ag。結果先證者APTT延長，一步法及發色底物法檢測的FⅧ：C均低于1．0％，血漿FⅧ：Ag為120．0％。APTT糾正試驗陰性，其他凝血、抗凝及纖溶相關檢測均未見異常。診斷為交叉反應陽性（CRM＋）的血友病A。患者F、8基因直接核苷酸測序發現3號外顯子存在28828A→G突變，導致His99Arg氨基酸改變，其母親該位點為雜合突變。體外表達研究結果顯示細胞上清液中His99Arg突變蛋白FⅧ：Ag及FⅧ：C分別為野生型的180．0％及5，8％，His99Ala突變蛋白FⅧ：Ag及FⅧ：C分別為野生型的45．0％和20．0％。Western blot顯示，His99Arg突變質粒表達上清液中FⅧ蛋白含量較野生型明顯增高，而His99Ala突變質粒表達上清液FⅧ蛋白含量較野生型減少。提示His99Arg為CRM＋血友病A突變而His99Ala為CRM-血友病A突變。結論體外檢測發現His99Arg和His99Ala兩種FVI能夠表達，但常規凝血檢測His99Arg突變FⅧ基本無功能，而His99Ala凝血功能也降低。